اندازه گیری هوموسیستئین تام پلاسما به روش کروماتوگرافی معکوس با کارایی بالا (RP-HPLC) بدون استفاده از استاندارد داخلی

سابقه و هدف: هوموسیستئین اسید آمینه ای با گروه آزاد تیولی است و بعنوان یک واسطه طی متابولیسم متیونین به سیستئین تشکیل می گردد. اندازه گیری هوموسیستئین تام پلاسما ممکنست در شرایط کلینیکی مختلفی از قبیل هوموسیستئین اوری، آترواسکلروز، ترومبوفیلی و کمبود ویتامین های B12 و اسید فولیک مفید و ارزشمند باشد. هدف از این مطالعه بررسی قابلیت های روش HPLC فاز معکوس با دتکتور فلورسانس جهت سنجش هوموسیستئین بوده است. مواد و روش ها: هوموسیستئین تام پلاسما بوسیله روش کروماتوگرافی معکوس با کارایی بالا (HPLC) با دتکتور فلورسانس بعد از احیا انواع هوموسیستئین پلاسما بوسیله تریس (2-کاربوکسی اتیل) فسفین (TCEP) و مشتق سازی با آمونیوم 7-فلوروبنزو 2-اکسا 1 و 3-دیازول 4-سولفونات (SBD-F) مورد سنجش قرار گرفت. یافته ها: حساسیت روش HPLC جهت سنجش هوموسیستئین در حد 0.2µmol/l، دقت روش (ضریب تغییرات CV) در یک مرحله بین 2.67 تا 4.56% و در بین مراحل و روزهای مختلف 5.43 تا 8.17% و صحت (بازیابی) روش بین 93 تا 103.4% بدست آمد. نتیجه گیری: نتایج بدست آمده از این مطالعه نشانگر آن است که روش HPLC با دتکتور فلورسانس برای سنجش هوموسیستئین روشی حساس (حد پایین 0.2µmol/l) و دقیق (ضریب تغییرات بین 2.67 تا 8.17%) است و دارای صحت مناسبی (بازیابی بین 93 تا 103.4%) می باشد و لذا روشی قابل اطمینان بخصوص در کارهای تحقیقاتی است. باتوجه به آنکه هوموسیستئین یک عامل خطرزا برای بیماری عروق کرونر می باشد، راه اندازی روش فوق از اهمیت زیادی برخوردار می باشد.